時(shí)下細胞研究很火的科研技術(shù)當屬單細胞測序，但此技術(shù)對細胞懸浮液的總量以及活性都有一定的要求，因此制備高質(zhì)量的單細胞懸浮液成為實(shí)驗成功的關(guān)鍵點(diǎn)。

單細胞測序涉及的細胞類(lèi)型多種多樣，如腸、肺、PBMC、胚胎、神經(jīng)、乳腺、干細胞等，而其中樣本的處理消化亦是重中之重，樣本前處理與后續的分析結果有著(zhù)莫大的關(guān)聯(lián)。如何在上機前得到非常優(yōu)質(zhì)的懸液呢？這里和大家分享一些制備優(yōu)質(zhì)單細胞懸液的小tips。

1、在樣本采集過(guò)程中，建議采用無(wú)菌樣品處理方式，包括使用不含核酸酶的試劑和耗材；

2、實(shí)體組織需要先處理，傳統組織處理方法有機械法，包括網(wǎng)搓法、研磨法。機械法一般適用樣本類(lèi)型為脾臟、淋巴結、胸腺；另外較溫和的方法有酶解法（使用胰蛋白酶類(lèi)、膠原酶、溶菌酶、彈性蛋白酶以及一些商業(yè)化包裝的組合酶），適用樣本類(lèi)型有肝臟、腎臟、心臟、肺臟、脊髓、腦、腸道、皮膚、腫瘤等。

3、如果您使用的是10x Genomics相關(guān)儀器和平臺，可以從官網(wǎng)查看10x Genomics不同樣本單細胞懸液制備官方建議或者利用關(guān)鍵詞查詢(xún)與自己樣本類(lèi)型相同的已發(fā)表的單細胞測序文獻。對于如何獲得高質(zhì)量的樣品，10X公司建議在單細胞懸液制備過(guò)程中，細胞重懸的緩沖液選用無(wú)Ca2+、Mg2+和EDTA的1× PBS，并用0.04% non-acetylated BSA清洗兩次（300rcf，5min），選擇其他緩沖液或培養基可能會(huì )對結果產(chǎn)生不同程度的影響。

4、細胞在處理過(guò)程受到外界環(huán)境影響，其基因表達譜可能會(huì )出現一些變化；有些細胞對環(huán)境極為敏感，可能會(huì )死亡裂解，造成RNA降解從而造成檢測中的背景細胞升高，進(jìn)而影響所獲得的數據質(zhì)量。實(shí)驗過(guò)程中需要盡量避免細胞死亡，不斷優(yōu)化細胞處理條件，加快實(shí)驗流程的進(jìn)度，減小對細胞的影響。

5、單細胞懸液制備過(guò)程中出現的細胞團、細胞碎片或纖維等雜質(zhì)會(huì )增加微流體芯片的堵塞風(fēng)險。如果存在細胞碎片和大團塊，請將樣品通過(guò) 40 μm Flowmi 細胞過(guò)濾器，細胞懸液體積損失小。

圖源：10x Genomics 的Protocol《 Fresh Frozen Human Peripheral Blood Mononuclear Cells for Single Cell RNA Sequencing》

圖源：《10x Genomics®Single Cell Protocols——Cell Preparation Guide》

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